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为帮助执业兽医(水生)科学选择和使用水产用抗菌素类药物,2021年,从常州市武进区人工养殖水生动物体内分离致病菌,测定了其对水产用抗菌素类药物的敏感性,现将结果公告如下。
1材料与方法
1.1供试药物
目前我国农业部以及国外允许使用的水产用抗菌素类药物(药物种类随国家标准渔药目录修订而变化):恩诺沙星、硫酸新霉素、甲砜霉素、氟苯尼考、盐酸多西环素、氟甲喹、磺胺间甲氧嘧啶钠(下表简称磺胺嘧啶)、磺胺甲噁唑+甲氧苄啶(下表简称噁唑+苄啶)。
1.2供试菌株
2021年,从武进区水产养殖户饲养的水生动物体内,分离的各种致病菌(菌株分离时间、地点和病鱼器官等详细情况见表1)。
表1菌株分离清单表
序号
菌株编号
采样时间
采样地点
水生动物种类
分离部位
是否发病
菌株种类
是否药敏检测
1
WJ21-01-1
2021.6.23
前黄镇
鳊鱼
腹水
是
嗜水气单胞菌
2
WJ21-01-2
肾脏
3
WJ21-01-3
4
WJ21-01-4
5
WJ21-01-5
6
WJ21-01-6
7
WJ21-01-7
8
WJ21-01-8
9
WJ21-01-9
10
WJ21-01-10
11
WJ21-01-11
12
WJ21-01-12
肝脏
13
WJ21-01-13
14
WJ21-01-14
雪堰镇
鲢鱼
15
WJ21-01-15
16
WJ21-01-16
17
WJ21-01-17
18
WJ21-01-18
鲫鱼
19
WJ21-01-19
20
WJ21-01-20
21
WJ21-01-21
22
WJ21-01-22
23
WJ21-01-23
24
WJ21-01-24
25
WJ21-01-25
26
WJ21-01-26
27
WJ21-01-27
28
WJ21-01-28
29
WJ21-01-29
鳙鱼
30
WJ21-01-30
31
WJ21-01-31
32
WJ21-01-32
33
WJ21-01-33
青鱼
维氏气单胞菌
34
WJ21-01-34
35
WJ21-01-35
36
WJ21-01-36
肠杆菌
37
WJ21-01-37
38
WJ21-01-38
39
WJ21-01-39
40
WJ21-01-40
41
WJ21-01-41
42
WJ21-01-42
43
WJ21-01-43
洛阳镇
草鱼
脾脏
44
WJ21-01-44
45
WJ21-01-45
46
WJ21-01-46
47
WJ21-01-47
48
WJ21-01-48
49
WJ21-01-49
50
WJ21-01-50
51
WJ21-01-51
52
WJ21-01-52
53
WJ21-01-53
54
WJ21-01-54
55
WJ21-02-1
2021.9.6
56
WJ21-02-2
57
WJ21-02-3
58
WJ21-02-4
59
WJ21-02-5
60
WJ21-02-6
61
WJ21-02-7
62
WJ21-02-8
63
WJ21-02-9
64
WJ21-02-10
65
WJ21-02-11
66
WJ21-02-12
67
WJ21-02-13
68
WJ21-02-14
69
WJ21-02-15
70
WJ21-02-16
71
WJ21-02-17
72
WJ21-02-18
鳃
73
WJ21-02-19
霍乱弧菌
74
WJ21-02-20
75
WJ21-02-21
76
WJ21-02-22
77
WJ21-02-23
78
WJ21-02-24
79
WJ21-02-25
80
WJ21-02-26
81
WJ21-02-27
82
WJ21-02-28
1.3供试菌株最小抑菌浓度的测定
按照日本化学疗法学会制定的标准法,首先将供试药物采用适宜的溶媒溶解后,用灭菌生理盐水分别稀释至1000.0mg/L的浓度。然后在无菌条件下,用灭菌后的液体培养基将药物稀释10倍,从而使培养基中药物的浓度达到100.0mg/L的浓度。再用定量移液枪向每支盛有2.9 mL 胰蛋白胨液体培养基的试管中加入2.9 mL含有药物的培养基,将试管在混悬器上混合均匀后,从中吸取2.9 mL含有药物的胰蛋白胨液体培养基加到下一试管中,以此类推制作成药物浓度分别为100.0mg/L、50.0mg/L、25.0mg/L……0.025mg/L的2倍稀释药物系列培养基试管。最后,定量吸取0.1mL浓度约为1.2×106cfu/mL活菌液(比浊法测定)加入上述每支试管中,摇匀。置于25℃条件下培养72 h,经肉眼观察证实无细菌生长试管中的最低药物浓度,即为药物的最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。
本次对以上82株菌株进行了药敏试验。试验采用南京菲恩医疗科技有限公司提供的药敏板进行,药敏板原理同上,具体操作步骤详见《定制药敏板使用说明》。
2结果
2.1嗜水气单胞菌对抗菌药物的感受性
嗜水气单胞菌是引起水生动物细菌性败血症等疾病的致病细菌。56株嗜水气单胞菌对各种抗菌药物感受性测定结果如表2所示。
表2 嗜水气单胞菌对各种抗菌药物的感受性
供试药物
恩诺沙星
药物浓度(mg/L)
0.5
0.25
0.125
0.06
0.03
0.015
0.008
菌株数(株)
硫酸新霉素
256
128
甲砜霉素
512
氟苯尼考
盐酸多西环素
氟甲喹
磺胺嘧啶
1024
噁唑+苄啶
608/32
304/16
152/8
76/4
38/2
19/1
9.5/0.5
4.8/0.25
2.4/0.12
1.2/0.06
注:药敏结果超出最大或最小药物浓度范围时,在计算过程中以最大或最小浓度替代。
2.2维氏气单胞菌
维氏气单胞菌也可引起水生动物细菌性败血症等疾病。21株维氏气单胞菌对各种抗菌药物感受性测定结果如表3所示。
表3 维氏气单胞菌对各种抗菌药物的感受性
2.3其他菌
还有5株为其他种类的菌,包括2株肠杆菌和3株霍乱弧菌。这5种菌对各种抗菌药物感受性测定结果如表4、5所示。
表4 肠杆菌对各种抗菌药物的感受性
表5 霍乱弧菌对各种抗菌药物的感受性
3分析与建议
2021年,不同乡镇、不同养殖户池塘分离的菌株对不同药物敏感程度表现出较大差异,被采集到样本的养殖户可根据自身塘口报告选择用药。没有采集到样本的养殖户可参照上述结果,优先使用大数据分析后得出的普遍较敏感药物,具体如下:
对于鳊鱼养殖户来说,主要分离到的菌株多为嗜水气单胞菌,建议首选考虑采用硫酸新霉素和盐酸多西环素进行治疗,不推荐使用甲砜霉素、磺胺嘧啶和噁唑+苄啶三类抗生素。
对于草青鱼养殖户,分离到的菌株多为维氏气单胞菌,优先推荐硫酸新霉素、氟苯尼考和盐酸多西环素,不推荐使用恩诺沙星、甲砜霉素、磺胺嘧啶和噁唑+苄啶。